Метод сверхраспластывания ядер в профазе I мейоза и детальное исследование хромосом млекопитающих и рептилий
|
Даты проведения с 2018-01-01 по 2018-12-01 |
Для исследования кариотипов животных обычно используются цитогенетические методы с использованием препаратов митотических метафазных хромосом. Для более детального исследования хромосом применимы препараты распластанных хромосом на стадии профазы I мейоза, а точнее - пахитенных бивалентов (синаптированных гомологичных хромосом). Линейные размеры хромосом в пахитене мейоза примерно в 10 раз больше чем в метафазе митоза. Такие препараты активно используются для изучения структуры отдельных хромосом и динамики профазы I мейоза с помощью оптической флуоресцентной микроскопии. Однако для изучения тонких деталей структуры хромосом исследователи вынуждены применять уже не световую, а электронную микроскопию. При этом часть методов иммуноокрашивания значительно усложняется или вовсе неприменима.
Настоящая работа предлагает новый метод распластывания ядер на стадии профазы I мейоза для получения сверхраспластанных хромосом. То есть линейные размеры хромосом можно увеличить еще примерно в 5-10 раз. Таким образом, мы предлагаем исследование структуры хромосом и, в частности, распределения неоцентромер и сателлитной ДНК с помощью световой флуоресцентной микроскопии, с детализацией, ранее доступной только для метода электронной микроскопии.
Проведено сравнительное исследование воздействия различных гипотонических растворов и воздействий на суспензии при приготовлении препаратов распластанных ядер клеток, а также выбран оптимальный способ фиксации препаратов.
При помощи разработанного метода сверхраспластывания мейотических хромосом визуализирован СК-кариотип самца мыши Mus musculus L., 1758 и самца скальной ящерицы Darevskia raddei Boettger, 1892. Представлены детальные изображения тотальных препаратов синаптонемных комплексов и
отдельных хромосом. Проведено иммуноокрашивание белков репарации двунитевых разрывов ДНК на сверхраспластанных половых хромосомах и распределение двойных центромерных сигналов в хромосомах скальной ящерицы.СпомощьюметодаFISH исследовано взаиморасположение мажорного (Major) и минорного (Minor) сателлитов в прицентромерном гетерохроматине хромосом мыши.
Проект опубликовал
