Оптимизация условий фиксации клеток для микроскопии сверхвысокого разрешения

Световая микроскопия широко применяется в различных биологических и медицинских исследованиях. Однако разрешающая способность светового микроскопа ограничена дифракционным барьером. Для преодоления этой проблемы в 2015 году была предложена методика расширяющей микроскопии, при которой образец, зафиксированный параформальдегидом, заключают гель, который разбухает при попадании в воду, тем самым увеличивая образец. Для равномерного увеличения геля его подвергают жесткой обработке - кипячению или протеолизу, чтобы разрушить связи между белком и фиксирующим агентом. В нашей работе предложено использовать для фиксации клеток DTBP (диметил-3,3′-дитиопропионимидат) - фиксатор для белковых молекул, который можно разрушить с помощью восстановления дисульфидной связи. Такое восстановление меньше разрушает образец, а также лучше сохраняет молекулы красителей для флуоресцентной микроскопии. Мы показали, что при использовании DTBP вместо параформальдегида наблюдается аналогичное расширение образца, и увеличивается яркость микропрепарата.

Автор:

Лукашев Лев; Класс: 11; Государственное бюджетное общеобразовательное учреждение города Москвы "Школа № 1547" г Москва,

Научный руководитель: Поварова Наталья Владимировна, младший научный сотрудник Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук

• Цели
• Задачи
• Актуальность
• Результаты
• Применение
• Оборудование